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高效液相色譜儀現(xiàn)在多做成單元組件，然后根據(jù)分析要求將各所需單元組件組合起來，最基本的組件是輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器和工作站(數(shù)據(jù)系統(tǒng))。此外，還可根據(jù)需要配置自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)、流動(dòng)相在線脫氣裝置和自動(dòng)控制系統(tǒng)等。圖10.1是普通配置的高效液相色譜儀的原理圖。輸液泵將流動(dòng)相以穩(wěn)定的流速(或壓力)輸送至分析體系，在色譜柱之前通過進(jìn)樣器將樣品導(dǎo)入，流動(dòng)相將樣品帶入色譜柱，在色譜柱中各組分被分離，并依次隨流動(dòng)相流至檢測(cè)器，檢測(cè)到的信號(hào)送至工作站記錄、處理和保存。

1、高壓(輸液)泵

高壓泵的作用是將流動(dòng)相以穩(wěn)定的流速(或壓力)輸送到色譜系統(tǒng)。其穩(wěn)定性直接關(guān)系到分析結(jié)果的重現(xiàn)性、精度和準(zhǔn)確性。因此其流量變化通常要求小于0.5％。流動(dòng)相流過色譜柱時(shí)會(huì)產(chǎn)生很大壓力，高壓泵通常要求能耐40～60MPa的高壓。

2、進(jìn)樣器

現(xiàn)代的液相色譜儀幾乎都采用耐高壓、重復(fù)性好和操作方便的閥進(jìn)樣器。最常用的是六通閥進(jìn)樣器，進(jìn)樣體積由定量管確定，通常使用的是10，20和50μL體積的定量管。進(jìn)樣器的結(jié)構(gòu)如圖10.2所示。操作時(shí)先將閥柄置于采樣位置(10ad)，這時(shí)進(jìn)樣口只與定量管接通，處于常壓狀態(tài)，用微量注射器(體積應(yīng)大于定量管體積)注入樣品溶液，樣品停留在定量管中。將進(jìn)樣器閥柄轉(zhuǎn)動(dòng)60。至進(jìn)樣位置(inject)時(shí)，流動(dòng)相與定量管接通，樣品被流動(dòng)相帶到色譜柱中。

3、色譜柱

色譜柱是實(shí)現(xiàn)分離的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能穩(wěn)定。最常用的分析型色譜柱是內(nèi)徑4.6mm，長100～300mm的內(nèi)部拋光的不銹鋼管柱，內(nèi)部填充5～10μm粒徑的球形顆粒填料。不同的物質(zhì)在色譜柱中的保留時(shí)間不同，依次流出色譜柱進(jìn)入檢測(cè)器。

4、檢測(cè)器

檢測(cè)器是用來連續(xù)檢測(cè)經(jīng)色譜柱分離后流出物的組成和含量變化的裝置。它利用被測(cè)物的某一物理或化學(xué)性質(zhì)與流動(dòng)相有差異的原理，當(dāng)被測(cè)物從色譜柱流出時(shí)，檢測(cè)器把化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)化為可測(cè)量的電信號(hào)，以色譜峰的形式表現(xiàn)出來。幾種主要檢測(cè)器的基本特性列于表10.1。

5、紫外-可見光(UV-VIS)吸收檢測(cè)器

UV-VIS吸收檢測(cè)器既有較高的靈敏度和選擇性，也有很寬廣的應(yīng)用范圍。由于UV-VIS對(duì)環(huán)境溫度、流速、流動(dòng)相組成等的變化不是很敏感，所以適用于梯度淋洗。用UV-VIS檢測(cè)時(shí)，為了得到高的靈敏度，常選擇被測(cè)物質(zhì)能產(chǎn)生最大吸收的波長作檢測(cè)波長，但為了選擇性或其他目的也可適當(dāng)犧牲靈敏度而選擇吸收稍弱的波長，另外，應(yīng)盡可能選擇在檢測(cè)波長下沒有背景吸收的流動(dòng)相。

二極管陣列UV-VIS檢測(cè)器可以瞬間實(shí)現(xiàn)紫外-可見光區(qū)的全波長掃描，同時(shí)得到時(shí)間一波長-吸收強(qiáng)度三維色譜圖。它可與色譜工作站聯(lián)用獲得樣品純度的信息。

6、示差折光檢測(cè)器

示差折光檢測(cè)器也稱折射指數(shù)檢測(cè)器(RI)，是一種通用型檢測(cè)器。凡是與流動(dòng)相的折射率有差別的被測(cè)物都可以采用RI檢測(cè)。在多數(shù)情況下，被測(cè)物與流動(dòng)相的折射率都有差異，所以RI檢測(cè)器應(yīng)用范圍很廣，特別是在凝膠色譜中應(yīng)用較多。但與其他檢測(cè)方法相比，靈敏度要低1～3個(gè)數(shù)量級(jí)。因?yàn)檎凵渎蕦?duì)溫度的變化非常敏感，因此難于用于梯度洗脫。

7、熒光、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器

許多有機(jī)化合物，特別是芳香族化合物、生化物質(zhì)，如有機(jī)胺、維生素、激素、酶等，被一定強(qiáng)度和波長的紫外光照射后，發(fā)射出較激發(fā)光波長要長的熒光。熒光強(qiáng)度與激發(fā)光強(qiáng)度、量子效率和樣品濃度成正比。有的有機(jī)化合物雖然本身不產(chǎn)生熒光，但可以與發(fā)熒光物質(zhì)反應(yīng)，衍生化后檢測(cè)。熒光檢測(cè)的最大優(yōu)點(diǎn)是有非常高的靈敏度和良好的選擇性，靈敏度要比紫外檢測(cè)器高2～3個(gè)數(shù)量級(jí)，而且所需樣品量很小，特別適合于藥物和生物化學(xué)樣品的分析。

化學(xué)發(fā)光的原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，生成處于激發(fā)態(tài)的反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物，當(dāng)它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)發(fā)射出光子，因?yàn)槲镔|(zhì)激發(fā)態(tài)的能量來自于化學(xué)反應(yīng)，故稱化學(xué)發(fā)光。化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、價(jià)格便宜，而且靈敏度和選擇性都很高，是一種有實(shí)用價(jià)值的檢測(cè)方法。

8、電化學(xué)檢測(cè)器

電化學(xué)檢測(cè)器是利用物質(zhì)的電活性，通過電極上的氧化或還原反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。電化學(xué)檢測(cè)有很多種，如電導(dǎo)、安培、庫侖、極譜、電位等，應(yīng)用較多的是安培檢測(cè)器。電化學(xué)檢測(cè)器對(duì)流動(dòng)相的限制較嚴(yán)格，電極污染常造成重現(xiàn)性差等缺點(diǎn)，所以一般只用于檢測(cè)那些既沒有紫外吸收又不產(chǎn)生熒光但有電活性的物質(zhì)。

9、工作站

工作站可在線模擬顯示所有分析過程，自動(dòng)采集數(shù)據(jù)、處理和儲(chǔ)存，并能實(shí)現(xiàn)分析過程中儀器的自動(dòng)控制。如果設(shè)置好有關(guān)分析條件和參數(shù)，可以自動(dòng)給出最終分析報(bào)告。